В конце XIX и начале XX веков хлороформ использовался как анестетик при проведении хирургических операций. Однако в данной роли он впоследствии был заменён более безопасными веществами. В настоящее время (2005 год) хлороформ используется при производстве фреонового хладагента R-22.
Хлороформ также используется в качестве растворителя в фармакологической промышленности, а также для производства красителей и пестицидов.
Хлороформ, содержащий дейтерий (CDCl3) — наиболее общий растворитель, используемый в ядерном магнитном резонансе (ЯМР).
Поступающий в продажу хлороформ содержит этиловый спирт (1-2%)в качестве стабилизатора, который связывает образующийся при длительном хранении на свету и в присутствии кислорода фосген.